本文引自：https://www.cnblogs.com/yuanlipu/p/7442611.html（个别地方本人经过验证后修改添加）

方法一：亲测可用（此方法在二次打开时，弹出提示信息，退出时闪现退出窗口，体验感不太好）

在项目的第一个窗体的启动事件中 如form1_load() 中调用如下语句：

//判断是否重复打开
public void check(object sender, EventArgs e)
{
    System.Diagnostics.Process[] myProcesses = System.Diagnostics.Process.GetProcessesByName("WindowsFormsApplication1");//获取指定的进程名   
    if (myProcesses.Length > 1) //如果可以获取到知道的进程名则说明已经启动
    {
        MessageBox.Show("程序已启动！");
        Application.Exit();              //关闭系统
    }
}

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方法二 ：未测试（引用前未测试，经本人测试可用，个人感觉比方法一要好些，二次打开时就提示，没有方法一中的闪现退出窗口的现象）

在项目的启动引导文件 Program.cs中加入判断语句：

using System;
using System.Collections.Generic;
using System.Linq;
using System.Threading.Tasks;
using System.Windows.Forms;

namespace WindowsFormsApplication1
{
    static class Program
    {
        /// <summary>
        /// 应用程序的主入口点。
        /// </summary>
        [STAThread]
        static void Main()
        {
            bool isRuned;
            System.Threading.Mutex mutex = new System.Threading.Mutex(true, "OnlyRunOneInstance", out isRuned);
            if (isRuned)
            {
                Application.EnableVisualStyles();
                Application.SetCompatibleTextRenderingDefault(false);
                Application.Run(new Form1());
                mutex.ReleaseMutex();
            }
            else
            {
                MessageBox.Show("程序已启动!", "提示", MessageBoxButtons.OK, MessageBoxIcon.Information);
            }
        }
    }
}